一、洗板機機理的研究?xml:namespace>
1、 快速的、與殘留液量相關(guān)的直接稀釋過程;
2、 受擴散影響、與時間相關(guān)的殘留液層的間接稀釋過程;
3、 優(yōu)化洗液的運動可以降低殘留層,改善洗滌的效率,降低背景變異,提高整個
試驗的靈敏度;
4、 相同的振幅與頻率對洗滌效果有影響;
5、 循環(huán)次數(shù)、浸泡時間、沖洗壓力、沖洗時間對洗滌效果的影響在以上研究中,
有指導(dǎo)意義的是關(guān)于兩個物理過程的分析,與殘留量相關(guān)的直接稀釋要求盡可能少的殘留量,與反應(yīng)相關(guān)的間接稀釋,要求有一定的浸泡時間。另外,多次洗滌對效果有改進;底部沖洗由于距離近,沖力大,可改善洗滌效果。
二、洗板機的發(fā)展狀況
洗板儀器的發(fā)展,可以大致分為三個階段,簡易型、自動型、集成環(huán)境式洗板機。
1、簡易型也可稱為手動式洗板器,一般由負壓泵與清洗頭可完成最基本的吸液,也有可完成加液動作的裝置。這類裝置,由于成本極低,使用方便,工作量不大時可以使用。
2、自動式洗板機:可根據(jù)用戶的設(shè)置完成規(guī)定次數(shù)與條數(shù)的洗板工作,有的具有簡單的存貯功能。主要目的是利用自動化技術(shù),替代手工勞動。其中有條式與板式之分。如LABSYSTEM的W4、BIO-RAD早期的1250、拓普公司的DEM-2等。
3、集成環(huán)境式洗板機是隨著ELISA的發(fā)展、由儀器生產(chǎn)廠商根據(jù)ELISA應(yīng)用專家的建議,結(jié)合各自對洗板技術(shù)的研究而發(fā)展起來的,其特點在于提供良好的洗板環(huán)境,強調(diào)洗滌效果而非自動化,具有一定的智能特性,如LABSYSTEM的ACSENT WASH,拓普的DEM-3等。
4、洗板環(huán)境實際上是一組有利于改進洗滌效果的參數(shù)及洗滌動作。對于具體應(yīng)用來說,有的很實用,效果也不錯,如底部沖洗、兩點吸液、震動、交叉吸液(漂洗)等;有的只有廠家的廣告詞而已。精心設(shè)計的洗板條件確實可以取得很好的效果。
5、符合中國ELISA應(yīng)用具體情況的洗板機,除了洗滌徹底、穩(wěn)定、可靠的要求外,還應(yīng)具有:中文顯示、操作簡便、具有微孔板位置調(diào)節(jié)功能、配件方便且價格合理、售后服務(wù)良好,具有兩點吸液、底部沖洗、交叉吸液等功能,可洗滌48孔板等。
三、國內(nèi)常見洗板機簡介
洗板,是PCR ELISA實驗中重要的操作程序,是避免產(chǎn)物污染的關(guān)鍵步驟。另外,洗板的好壞,直接關(guān)系到實驗的成敗。在沒有洗板機的情況下,PCR ELISA實驗中洗板是整個實驗中控制污染的重要環(huán)節(jié),須十分小心操作。正確使用洗板機,采用相應(yīng)的防污染措施可減少污染機會。
中國市場常見的洗板機一覽表
生產(chǎn) 廠家 | 產(chǎn)品 型號 | 適用 微孔板 | 清洗 頭 | 加液量 (uL) | 殘留量 (uL) | 浸泡 時間 | 震 動 | 兩點 吸液 | 底部 沖洗 | 洗液 種類 |
拓普 | DEM-2 | 96/48 | 8/12 | 0-500 | <6 | 0-600s | 無 | 無 | 有 | 1 |
拓普 | DEM-3 | 96/48 | 8/12 | 0-500 | <2 | 0-240s | 有 | 有 | 有 | 1 |
拓普 | DEM-3A | 96/48 | 8/12 | 50-3600 | <2 | 0-240s | 有 | 有 | 有 | 2 |
上海雷勃 | Well wash4 | 96 | 8/12 | 0-750 | <5 | 0-600s | 無 | 無 | 無 | 1 |
雷勃 | Well wash | 96 | 8/12 | 50-1000 | <3standard | 1-3600s | 有 | Sweep | 無 | 2 |
Labsystem | Ascent |
| 16/24 |
| <1sweep |
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|
Bio-Rad | 1250 | 96 | 8/12 | 50-400 | <5 | 0-250s | 無 | 無 | 無 | 1 |
Bio-Rad | 1575 | 96 | 8/12 | 50-3000 | <2 | 0-59Min | 有 | Sweep | 有 | 1 |
Bio-Tek | Elx50 | 96 | 8/12 | 50-3000 | <5 | 0-600s | 有 | - | - | 1 |
Awarenes | Fax2600 | 96 | 8/12 | 0-500 | <3 | 0-99Min | 無 | 無 | 無 | 1 |
TECAN | Columbus | 96 | 8/12 | 50-3000 | <2 | 1-24h | 有 | 有 | 有 | 2 |
四、選購洗板機的注意事項
1、關(guān)鍵指標:殘留量:<2uL
能否提供可選擇的洗板環(huán)境:洗板次數(shù)、條數(shù)、浸泡時間等是洗板機的基本參數(shù),一般均可滿足。建議選擇具有底部沖洗、兩點吸液等功能的儀器;底部沖洗有利于減小微孔板底部的干擾性吸附;兩點吸液可大大降低微孔液體殘留量。這對改進洗滌效果很有效。最小的殘留量對PCR ELISA非常重要,因為在PCR ELISA操作中不允許拍板,以防污染。
2、是否對國產(chǎn)試劑盒具有兼容性與擴展性
兼容性主要是對于國內(nèi)不同規(guī)格、尺寸略有差異的微孔板的兼容,儀器應(yīng)具有對微孔板的位置調(diào)節(jié)功能,適應(yīng)國內(nèi)試劑的實際情況。擴展性主要是為了適應(yīng)新出現(xiàn)的一些應(yīng)用情況,如上海科華新增加的86式微孔板,許多洗板機無法清洗。
3、考察儀器的可靠性與洗滌效果的可靠性
一是儀器自身的可靠性,保證儀器在使用壽命期內(nèi)可以正常顯示、精確運動等,這可通過考查儀器生產(chǎn)廠商的技術(shù)與生產(chǎn)實力;一是洗滌效果的可靠性,即真正達到代替手工洗滌、甚至優(yōu)于手工洗滌的目的,這需要咨詢使用該儀器的上級單位或典型用戶。
4、配件是否充分
廠方是否可以提供常用的、易損的配件,如清洗頭、應(yīng)該8道、12道各備用一個,并且定期淘汰,象洗液瓶、硅膠管等應(yīng)方便買到。
5、售后服務(wù)是否及時、價格是否合理
洗板機是使用率相對較高的儀器,單從運動角度對比,其頻率是酶標儀的幾十倍,有的醫(yī)院使用兩年就報廢,原因在于沒有售后服務(wù)或售后服務(wù)價格太高,有的僅因為缺少一個配件而使整機報廢,十分可惜。故及時的售后服務(wù)與相對合理的服務(wù)價格,是購買洗板機應(yīng)考慮的因素。從保證洗板機效果的角度,建議用戶根據(jù)使用情況,對洗板機進行定期的維護,而不是被動地等儀器不能工作時再去修理,這一工作可由廠家完成或在廠家協(xié)助下由有關(guān)人員完成。
6、人機界面是否友好,最好是中文顯示
五、洗板機使用中注意事項
1、 有一定地洗滌次數(shù):多次洗滌有利于取得好的效果,一般不超過6次。
2、 注意每孔的加液量:以加滿為宜,但不可溢出,一般為每控300微升。
3、 建議在洗滌前進行位置調(diào)節(jié),吸針要到微孔底部,以降低殘留量。因為一般ELISA
實驗洗滌結(jié)束后要求扣板,但此步驟在PCR-ELISA中易造成污染,故殘留量應(yīng)盡量減少。不能象一般ELISA操作一樣用力扣板。
4、 建議用戶采用兩點吸液與底部沖洗方式,以得到好的洗滌效果。
5、 如果作PCR-ELISA液罐應(yīng)加有1%次氯酸鈉,加入的量不得少于產(chǎn)生廢液的量。每
天使用完畢后應(yīng)用1%次氯酸鈉沖洗管路及清洗頭,然后用雙蒸水沖洗管路。
6、 定期維護、檢修儀器及配件。